（1）平板上有过多的水分；

（2）划线时接种环未经反复灼烧。

（3）多区划线，三区或四区划线，越是稀释到4区，间距要越宽。

（1）灭菌温度要严格控制，按照要求灭菌，尤其含糖量较高的培养基温度不应太高，过高会导致糖分焦化，影响质量。

（2）琼脂培养基不能反复溶化。反复溶化会破坏培养基中的营养成分。

（3）培养基不能反复灭菌，反复灭菌也会导致营养成分的破坏。

（4）含琼脂的培养基灭菌后，要摇匀。

（5）分装培养基前要使培养基完全溶解。

（1）平板：大多数平板如VRBA、DC、尿素酶生化管、显色系列等要避光低温保存。

（2）干粉培养基：避光干燥，结块后不能使用。

（3）亚碲酸钾卵黄增菌液、50%卵黄乳液等：冷冻保存，使用时，要常温解冻，避免水浴加热。

（4）抗生素类：冷藏保存，温度过高会导致灵敏度的下降。

（5）兔血浆：冷藏保存少量的红色不会影响结果。

按SN、GB等标准或培养基的使用说明所述时间进行观察，时间过短或时间过长，单菌落的特征都不会很明显。如单增李斯特氏菌显色培养基，时间短单菌落看不到卵磷脂环，时间长绵羊李氏菌也会产生沉淀环。OXA、PALCAM的观察也如此，时间过长，李氏菌使整个平板成黑色，不利于观察单个菌落。霉菌要3天后要及时观察计数，防止时间长成一片。

（1）温度的掌握:卵黄和抗生素类添加的温度都不应太高。

（2）定量: 过多会抑制一些目标菌，太少又导致杂菌的过度生长。

（1）真菌类：25-28℃培养

（2）细菌类：李氏菌在增菌和生化中要求培养温度在30℃左右。

（3）其他一般在36℃左右

穿刺接种、倾注接种、涂布接种、划线接种。